血細胞計數板

血球計數板是一種用於計數細胞的設備。它原先是被設計用作全血球計數的。

血球計數板:兩側的反光的方形是計數室。
裝載血球計數板
血球計數板的單元格(見表)
血球計數板是由 Louis-Charles Malassez 發明的。其由一個帶有矩形的鋸齒狀的計數室的厚載玻片組成。計數室被精確地畫上格線以保證每個單元格的大小相等,並且每個格子的深度也相同,故而通過血球計數板可以測量一定體積液體中的細胞數。

規格

血細胞計數板中分布 1 x 1 mm (1 mm2) 的小正方形框;這些正方形框又被進一步分為三種規格:0.25 x 0.25 mm (0.0625 mm2)、0.25 x 0.20 mm (0.05 mm2)、0.20 x 0.20 mm (0.04 mm2);其中心部分又被進一步分為 0.05 x 0.05 mm (0.0025 mm2) 的正方形格。其各處厚度均勻,皆為 0.1 mm。[1]

規格 面積 0.1 mm 深度時的體積
1 x 1 mm 1 mm2 100 nL
0.25 x 0.25 mm 0.0625 mm2 6.25 nL
0.25 x 0.20 mm 0.05 mm2 5 nL
0.20 x 0.20 mm 0.04 mm2 4 nL
0.05 x 0.05 mm 0.0025 mm2 0.25 nL

使用

欲使用血細胞計數器,首先要確保蓋玻片被正確地放置於計數室上,檢驗標誌是可看見牛頓環。這樣的話細胞懸浮液就會因毛細作用被吸至計數室和蓋玻片中的縫隙。而在蓋玻片中每個單元格的細胞數量可以使用顯微鏡直接數出,並且可以通過觀察區分出不同細胞。因為體積和在此體積中的細胞數量已知,故溶液中的細胞密度可以使用以下公式得出:
  [2]

其中,  為 細胞密度,  為每個單元格中細胞數量的平均值, 為每個單元格的體積, 為稀釋倍數

計數時,在每個單元格中,若細胞在單元格的邊緣上是,通常僅計數左側及上方的的格線及其所夾頂點的上的細胞,而忽略右側及下方格線及另外三個頂點上的細胞,即「記上不計下,記左不計右」。[3]

注意事項

 
100倍放大的空白血細胞計數板
  • 樣品在測量前必須被均勻混合,以保證其具有代表性,而非僅僅從以特定區域中取樣。
  • 應做適當的稀釋,以保證細胞數量可測。若未進行足夠的稀釋,則細胞會因過於密集而難以計數;若稀釋過度,則測量時的細胞數不足以支撐推斷原溶液細胞密度。
  • 進行測量兩次測量,並比對結果。若二者差異超過正常值,則取樣方法可能不可信(如溶液未均勻混合)。

應用

  • 全血細胞計數:尤其適用於血細胞不正常而無法使用機器計數的病人。
  • 精液分析
  • 細胞培養:接種或記錄細胞生長
  • 釀酒: 準備酵母。
  • 為下游分析做準備的過程:一些實驗需要有準確的細胞數量,如聚合酶鏈式反應流式細胞術,而還有一些實驗需要細胞有較強的生存能力。
  • 測量細胞大小:顯微檢查時,細胞大小可通過和照片上的已知的單元格大小比對。[4]

圖片

參考資料

  1. ^ "Hemocytometer: square sizes"頁面存檔備份,存於網際網路檔案館). 
  2. ^ Basic Hemocytometer usage. [2016-01-22]. (原始內容存檔於2013-03-22). 
  3. ^ Strober W. Monitoring cell growth. Coligan JE, Bierer BE, Margulies DH, Sherach EM, Strober W (編). Current Protocols in Immunology 5. USA: John Wiley & Sons. 2001: A.2A.1. doi:10.1002/0471142735.ima03as21. 
  4. ^ "Measuring cell size with a hemocytometer"頁面存檔備份,存於網際網路檔案館).