定慧寺巷是中國江蘇省蘇州古城東南部的一條東西向街道，西到鳳凰街，東到官太尉河，全長294米，寬11米，小方石路面，西口建有花崗石牌坊，箱內兩側建築為仿古風格。
定慧寺巷得名於巷內的定慧寺。文化大革命期間曾改名雙塔巷。
定慧寺巷內有定慧寺、羅漢院雙塔等古蹟。定慧寺巷南側原有王長河，1863年清軍入蘇州城後，在雙塔寺斬殺太平軍達2萬人，此河被人頭填平。
